PCR實(shí)驗(yàn)室中實(shí)驗(yàn)反應(yīng)的特點(diǎn)是具有較大的擴(kuò)增能力與的靈敏性,但令人的問(wèn)題是易污染,極其微量的污染即可造成假陽(yáng)性的產(chǎn)生。面對(duì)眾多的污染源,比如樣本交叉污染、試劑儀器交叉污染、克隆質(zhì)粒污染、PCR擴(kuò)增產(chǎn)物污染、還有極容易忽視的氣溶膠污染,氣溶膠是由固體或液體小質(zhì)點(diǎn)分散并懸浮在氣體介質(zhì)中形成的膠體分散體系,在空氣與液體面摩擦?xí)r,比如在操作時(shí)比較劇烈地?fù)u動(dòng)反應(yīng)管,開(kāi)蓋時(shí)、吸樣時(shí)及污染進(jìn)樣槍的反復(fù)吸樣都可形成氣溶膠而污染。這樣的污染來(lái)的悄無(wú)聲息,防不勝防。
雖然這些污染對(duì)PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響已經(jīng)受到了廣泛重視,多數(shù)PCR實(shí)驗(yàn)室對(duì)污染控制都采取了各種辦法,比如定期大掃除清理、劃分操作區(qū)域、試劑分裝、操作謹(jǐn)慎、重復(fù)實(shí)驗(yàn)、多角度驗(yàn)證結(jié)果。但是微量的核酸片段就能被擴(kuò)增,所以對(duì)污染物的控制不僅僅是做到這些就能夠杜絕和避免的,關(guān)鍵是需要從源頭控制。目前多數(shù)生物試驗(yàn)室,分子實(shí)驗(yàn)每天都在大規(guī)模進(jìn)行,污染源已經(jīng)無(wú)處不在。特異性的,非特異性的,同源的,非同源的,廣泛分布在樣本容器、實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面,試劑溶液中、儀器表面內(nèi)管附著等等。以下就是為了清除這些污染源研究出來(lái)的方法:
解決PCR實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)被污染的方法
1、酒精擦拭:將核酸沉淀,擦拭后保證被污染表面得到一定程度的緩解(簡(jiǎn)單、方便、成本低)。
2、修飾:標(biāo)記遺傳物質(zhì),阻止聚合酶與核酸的結(jié)合,從而抑制DNA擴(kuò)散(效果相對(duì)較好)。
3、酶解:酶可將長(zhǎng)鏈的核酸分子降解成小片段(速度快、效果效果相對(duì)相對(duì)較好)。
4、高壓變性:高壓可以將核酸降解成20-30bp的小片段(徹底、成本低)。
5、紫外照射:PCR產(chǎn)物中嘧啶堿基會(huì)形成二聚體,延伸終止(方便、范圍廣、成本低)。
有實(shí)驗(yàn)室的地方,就不可避免的會(huì)出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室污染。實(shí)驗(yàn)室的污染,不僅會(huì)影響實(shí)驗(yàn)與科研的質(zhì)量和效果,還對(duì)實(shí)驗(yàn)室工作人員的身體健康造成損害。一個(gè)好的PCR實(shí)驗(yàn)室,應(yīng)當(dāng)時(shí)刻注意污染的監(jiān)測(cè),考慮有無(wú)污染、是什么原因造成的污染,以便采取措施,防止和消除污染。
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