液相色譜分析儀簡單操作要點

液相色譜儀是分析工作者常用的“一門武器”。液相軟件均已具備了強(qiáng)大的數(shù)據(jù)處理功能，如能庖丁解牛般使用，便可將此測定做到事半功倍、輕松自如。

一、 水相中的溶質(zhì)溶解方式

水相中需溶解的無機(jī)鹽和表面活性劑等固體溶質(zhì)，建議采用加熱法，不建議采用振搖、超聲等方式。因此種方式的溶解，溶質(zhì)可能處于“臨界膠團(tuán)濃度”，其后一旦遇到某特殊情形（如遇有機(jī)溶劑、溫度劇降等），極易析出少量結(jié)晶；而一旦析出，便將損傷儀器和色譜柱，呈現(xiàn)泵頭處析出“鹽和白粉”的現(xiàn)象。

二、 流動相的配制與使用

1. 恒度洗脫

一定是將水相與有機(jī)相混合后、抽濾（使用混合型過濾膜），用一個管路（如A管）泵入儀器，這是使用的原則。切勿因節(jié)約有機(jī)相、便于摸索色譜條件等原因而使用兩個管路（一個純水相、一個純有機(jī)相）泵入儀器，即便配制了脫氣機(jī)。因此種情形極易造成水相中鹽和表面活性劑的少量析出。

剩余流動相完全可繼續(xù)使用，密封后放置陰涼處；待下次試驗時與新配制的流動相混合后抽濾即可。無需擔(dān)心發(fā)霉、無機(jī)鹽析出、揮發(fā)、比例不準(zhǔn)等問題，這些皆為疑神疑鬼的表現(xiàn)。實踐是檢驗真理的標(biāo)準(zhǔn)！實踐吧~

2. 梯度洗脫

流動相配制為科學(xué)的方式是：A相為高比例的水相-低比例的有機(jī)相、B相為低比例的水相-高比例的有機(jī)相（英國藥典幾乎均如此）；其次為：A相為高比例的水相-低比例的有機(jī)相、B相為純有機(jī)相；不科學(xué)的為：A相為純水相、B相為純有機(jī)相，如既有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)采用了此種方式，建議改為第二種或種方式，否則基線漂移嚴(yán)重，難以進(jìn)行穩(wěn)定的雜質(zhì)檢測。

梯度洗脫結(jié)束后，建議經(jīng)5分鐘回到初始狀態(tài)，再平衡5分鐘后開始下一針測定。這10分鐘的穩(wěn)定極為關(guān)鍵。切勿短時間內(nèi)回到初始狀態(tài)，會對儀器和色譜柱損傷較大。

三、 色譜柱的安裝

標(biāo)準(zhǔn)SOP應(yīng)為：

取A管路放入流動相瓶中→擰松泵頭→流速由0ml/min逐漸升至10ml/min，觀察尾液是否呈瀑布狀流出，持續(xù)10秒→擰緊泵頭→流動相呈拋射狀從安裝色譜柱的一端噴出，觀測是否呈拋物線狀，持續(xù)5秒→流速逐步降至1.0ml/min →安裝色譜柱，待20秒后，流動相從色譜柱另一端呈泉水狀涌出再安裝另一端→手握兩端螺絲帽，擰緊。

以上安裝順序遵循的是：

逐級排放氣泡和儀器內(nèi)存留的洗液，使得安裝后氣泡極難混入。本人曾試驗梯度洗脫連續(xù)一周，針與后一針主成分保留時間相差在6秒以內(nèi)。

四、 試驗后色譜柱的清洗

1.為常用的C8柱、C18柱

1.1 流動相僅為乙腈-水或甲醇-水時

繼續(xù)沖洗30分鐘，流速1.0ml/min，柱溫保持試驗時溫度，即可。

1.2 水相中有無機(jī)鹽、表面活性劑或三乙胺、高氯酸等物質(zhì)時

先采用純水（或含有2%甲醇），沖洗A管路（試驗采用哪個管路，就要從頭到尾沖洗該管路），時間30分鐘（如流動相中有表面活性劑，適當(dāng)增加時間），流速1.0ml/min，柱溫可較試驗溫度高出5~10℃；隨后更換成20%甲醇再沖洗30分鐘，流速1.0ml/min，柱溫箱加熱裝置關(guān)閉。結(jié)束后取下色譜柱放置陰涼處。

很多同仁其后采用高比例的甲醇沖洗，實屬畫蛇添足，導(dǎo)致殘余的有機(jī)相中水相遇到高比例的甲醇后析出少量鹽和表面活性劑，從而在泵頭上、色譜柱中析出，也導(dǎo)致了色譜柱壽命大為縮短。本人曾使用過一根約2000元的色譜柱，正著用了四年、倒著用了兩年（倒著用測非有關(guān)物質(zhì)）。

2. 其他類型色譜柱

查詢獲取如何科學(xué)合理地使用與清洗保存該類型色譜柱的方法，切勿盲動，否則導(dǎo)致色譜柱性能急劇下降。

五、 試驗順序

工作流程應(yīng)如下進(jìn)行：

(1) 0~2小時 配制流動相、對照品和供試品溶液等，切勿催促昨日試驗同事。

(2) 2~3小時 采用A管路注入流動相（B、C、D管路一般不用，除非梯度洗脫才用到B管路），平衡1小時。如流動相中有表面活性劑，建議前一晚小流速過夜，第二天上班后將流速增至1.0ml/min，平衡1小時后即可開始做試驗。

(3) 3~5小時 測定空白溶劑，一定要做到基線不漂移后方可開始測定。所謂“不漂移”，通常系指以1.0%自身對照溶液主成分峰高約20%高度來設(shè)定的視野范圍觀察所得，切不可設(shè)定得過小，使得雜質(zhì)峰顯得很突兀、基線抖動得很厲害，弄得人很擔(dān)心。

(4) 5~8小時 配制完所有樣品，預(yù)試了對照溶液和供試品溶液，設(shè)定好自動進(jìn)樣程序，程序后一針設(shè)定為小流速過夜，紫外燈關(guān)閉。切勿設(shè)定為切換至B管路洗脫，此舉得不償失。

(5) 9~24小時 放心回家，讓儀器自動進(jìn)樣，除非不穩(wěn)定的樣品（配制一份測定一針）。充分利用下班后的16小時，做到從容不迫、自若。如單位還無自動進(jìn)樣裝置，建議向領(lǐng)導(dǎo)申請購買，因一臺自動媲美三臺手動。

(6) 第二天0~0.5小時 檢查并計算昨晚試驗結(jié)果，如發(fā)現(xiàn)不良記錄，將流速增至1.0ml/min，平衡30分鐘后，測定重新配制的該份樣品即可（同時回校對照一針）。無需全部重新測定，不要過度謹(jǐn)小慎微。

(7) 第二天0.5~2.0小時 如上沖洗色譜柱，交給其后試驗同事。

六、 液相軟件的使用

現(xiàn)今幾大主流品牌的硬件性能已相差無幾，主要還是軟件的設(shè)計是否能使操作者得心應(yīng)手、隨心所欲。

建議掌握各軟件的批處理、編輯樣品處理模板等功能，做到一勞永逸，讓軟件充分為工作所用?！澳サ恫徽`砍柴工”：本人曾用20分鐘完成500個溶出度樣品數(shù)據(jù)處理，做出溶出曲線圖。體會一下~

七、 其他

1.如需使用正相系統(tǒng)，一定要單獨采用一臺儀器（如二手的、較為破舊的、淘汰的等），切勿采用異丙醇轉(zhuǎn)換，此舉對儀器損傷極大，等于“自殺”。

2. 正相所使用的流動相（如正己烷、環(huán)己烷等），無需抽濾，混勻超聲后即可使用，“大道至簡”。

3. 柱溫箱必須配制。如欲經(jīng)濟(jì)，可購買國產(chǎn)柱溫箱。