魚(yú)油產(chǎn)品中EPA、DHA含量測(cè)定氣相色譜儀
普瑞GC-9280型氣相色譜分析法通過(guò)新的樣品處理方法和相應(yīng)色譜條件的選擇，實(shí)現(xiàn)對(duì)魚(yú)油等保健品中EPA、DHA的含量測(cè)定。普瑞GC-9280型氣相色譜分析法通過(guò)直接加入2，6-二叔丁基對(duì)甲酚(bht)、內(nèi)標(biāo)二十三酸甲酯、鹽類(lèi)物質(zhì)來(lái)配置標(biāo)準(zhǔn)品和樣品溶液，直接進(jìn)樣進(jìn)行測(cè)定。通過(guò)對(duì)此方法做了方法學(xué)驗(yàn)證，專(zhuān)屬性好，無(wú)雜質(zhì)干擾；線性關(guān)系：r2＝0.9998；精密度6針EPA含量rsd為0.49％，DHA含量rsd為0.36％；回收率EPA達(dá)到99.5％，DHA達(dá)到99.7％。各項(xiàng)驗(yàn)證指標(biāo)良好，均符合法規(guī)要求。且本方法測(cè)定簡(jiǎn)便易行，適用于工業(yè)生產(chǎn)中不同批次魚(yú)油樣品的測(cè)定。
作為優(yōu)選，樣品溶液的配制方法：
魚(yú)油原料：稱(chēng)取20mg樣品于玻璃瓶中，按照衍生化部分描述進(jìn)行操作；
魚(yú)油軟膠囊：取20粒軟膠囊的內(nèi)容物于一燒杯中，充分混合，確保不分層，然后按照衍生化部分描述進(jìn)行操作。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，普瑞GC-9280型氣相色譜分析法具有如下顯著優(yōu)點(diǎn)：
1、普瑞GC-9280型氣相色譜分析法是以GC法測(cè)定魚(yú)油中EPA和DHA的含量，而且此GC法適用于軟膠囊、魚(yú)油原料中EPA和DHA含量的測(cè)定。
2、普瑞GC-9280型氣相色譜分析法先用20g/l氫氧化鈉-甲醇溶液與樣品進(jìn)行皂化反應(yīng)后，再用三氟化硼-甲醇溶液與樣品溶液進(jìn)行反應(yīng)，可更徹底甲酯化樣品。
3、用bht異辛烷溶液溶解樣品，除易于溶解相應(yīng)樣品外，bht還能起到抗氧化作用，減少樣品處理過(guò)程中的損失。
4、內(nèi)標(biāo)法的運(yùn)用，保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確。
5、色譜柱選擇hpinnowax，30m×0.25mm，0.25μm,能更好的對(duì)組分進(jìn)行分離的同時(shí)，節(jié)約儀器運(yùn)行時(shí)間。
6、根據(jù)魚(yú)油中各組分沸點(diǎn)的不同，對(duì)柱溫溫度進(jìn)行選擇，能更好分離樣品，節(jié)約儀器運(yùn)行時(shí)間。
以下所用試品及試劑：
試劑：丁羥甲苯(bht)：分析純；二十三酸甲酯：標(biāo)準(zhǔn)品；氫氧化鈉：分析純；甲醇：色譜級(jí)；14％三氟化硼甲醇溶液：分析純；異辛烷：色譜級(jí)；氯化鈉：分析純；無(wú)水硫酸鈉：分析純；水：超純水。
標(biāo)準(zhǔn)品：EPA甲酯批號(hào)：bcbm9475v，純度：≥98.5％，來(lái)源：sigma-aldrich
DHA甲酯批號(hào)：bcbn2286v，純度：≥98.5％，來(lái)源：sigma-aldrich；
樣品：1.魚(yú)油軟膠囊，2.魚(yú)油原料，
例1魚(yú)油軟膠囊中EPA、DHA含量的測(cè)定
魚(yú)油軟膠囊EPA和DHA含量的測(cè)定：
(1)bht溶液
取50mgbht溶于1000ml異辛烷。
(2)內(nèi)標(biāo)溶液
精密稱(chēng)取150mg二十三酸甲酯于25ml容量瓶，用bht溶解，并稀釋至刻度。
(3)對(duì)照品溶液的配制：
分別精密稱(chēng)取16mgEPA標(biāo)準(zhǔn)品、12mgDHA標(biāo)準(zhǔn)品于10ml容量瓶，用內(nèi)標(biāo)溶液溶解，并稀釋至刻度線。
(4)樣品處理：
成品(軟膠囊)：取20粒軟膠囊的內(nèi)容物于一燒杯中，充分混合，確保不分層。然后按照衍生化部分描述進(jìn)行操作。
(5)衍生化：
移取2.0ml內(nèi)標(biāo)溶液于每一玻璃瓶中，氮?dú)獯蹈桑患尤?.5ml20g/l的氫氧化鈉-甲醇溶液，擰緊聚四氟乙烯瓶帽；水浴加熱并攪拌7min。冷卻至室溫；加2ml三氟化硼甲醇溶液，擰緊瓶帽；水浴加熱，并時(shí)時(shí)振搖30min；冷卻至40～50℃，加入1ml異辛烷；轉(zhuǎn)移溶液至20ml試管；加蓋，并快速振搖30s；立刻加入5ml飽和氯化鈉溶液于玻璃瓶中；加蓋，徹底完全振搖15s；轉(zhuǎn)移上層液于10ml試管；用1ml異辛烷重復(fù)萃?。环謨纱斡?ml水沖洗異辛烷層；用無(wú)水硫酸鈉干燥，得到待檢測(cè)樣品溶液。
(6)采用氣相色譜儀對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)：
色譜條件：進(jìn)樣量1μl，
a)色譜柱：hpinnowax，30m×0.25mm，0.25μm；
b)載氣：氮?dú)猓?/p>
c)柱溫：170℃，保持5min；1.5℃/min至188℃保持2min；1.0℃/min